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膜表达热休克蛋白70真核表达载体的构建及其对肿瘤细胞的转染 总被引:2,自引:0,他引:2
目的构建普遍适合性的膜表达热休克蛋白70(HSP70)的真核表达载体,修饰并建立HSP 70表达并结合在细胞膜表面的肿瘤细胞.方法RT-PCR法从人胚肾中获取HSP 70的cDNA,扩增成带酶切位点的目的基因.选择载体pDisplay,将目的基因插入载体多克隆酶位点中.DNA测序证实后,以脂质体转染的方法,将载体转染到黑色素瘤细胞.用G418抗性筛选获得阳性克隆.结果酶切电泳和DNA测序证实载体构建正确;目的基因的上游带信号肽序列,下游带跨膜序列.RT-PCR产物电泳、Westem Blotting、激光共聚焦显微镜和流式细胞术证实大量HSP 70表达并结合在转染的黑色素瘤细胞膜表面.结论成功地构建了膜表达HSP 70的真核表达载体;转染到黑色素瘤细胞后,细胞膜表面表达丰富的HSP70.转染细胞可以进一步制备新型瘤苗. 相似文献
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海水浸泡对失血性休克并腹部开放伤实验大鼠肿瘤坏死因子α及肠道热休克蛋白HSP-70的影响 总被引:1,自引:1,他引:0
目的探讨海水浸泡失血性休克并腹部开放伤对实验大鼠血浆肿瘤坏死因子α(TNFα-)和肠道热休克蛋白HSP-70水平变化的影响。方法建立失血并腹腔海水浸泡伤动物模型。实验大鼠随机分为对照组(n=6)、失血创伤组(n=14)、失血创伤海水浸泡组(n=14),失血创伤组为单纯失血性休克并腹部开放伤,失血创伤海水浸泡组将动物致伤后置入人工配置的海水中,于伤前和浸泡后30m in及1,1.5,3 h取血测定TNFα的变化,取肠道组织测定HSP-70的表达。结果失血创伤海水浸泡组血中TNFα较失血创伤组伤后明显升高并且高峰出现时间明显提前,肠道损伤病理变化明显重于失血创伤组,肠道组织中HSP-70含量在创伤早期显著升高,后又明显降低。结论TNFα-的过度表达在失血性休克并腹部开放伤后海水浸泡的病理生理变化中起重要作用,肠道组织细胞中HSP-70的异常表达在肠道组织细胞的应激反应机制中,可能有重要的意义。 相似文献
45.
文化休克(culture shock),又译为文化震撼或文化震惊,是指生活在某一种文化环境中的人初次进入到另一种文化环境,如到了不同的民族、社会群体中或地区甚至国家时所产生的思想混乱与心理上精神紧张综合征。新入校中专护生,由于文化环境的改变,往往会出现孤独、焦虑、无助等文化休克的种种表现,这些现象若不能及时得到解决,将不利于他们的全面健康状态的成长与发展。众所周知,WHO明确规定,健康不但是没有疾病和身体缺陷,还要有完整的生理、心理状态和良好的社会适应能力。因此,新入校中专护生这一特殊群体所产生的文化休克现象应引起学校有… 相似文献
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Objective To assess the effects of dopamine,dobutamine and norepinephrine on the P(g-a)CO2 and superior mesenteric blood flow in septic shock.Methods Rabbit septic shock model was established by challenging with intravenous injection of lipopolysaccharides from Escherichia coil(2 mg/kg).The rabbits with septic shock were randomly assigned to 3 groups-dopamine group(n = 8),dobutamine group(n = 8) and norepinephrine group(n = 8).Apart from volume resuscitation with normal saline solution [20 ml/(kg· h)],dopamine[5μg/(kg·min)],dobutamine[(5μg/(kg·min)]and norepinephrine [(1μg/(kg·min)]were infused in dopamine group,dobutamine group and norepinephrine group respeclively.Cardiac index(CI) and superior mesenteric blood flow index(SMBFI) were continuously monitored by doppler flowrneter.Gastric mucosal PCO2 was evaluated by gas tonometry every 10 min.Arterial and venous blood gas analyses and lactate levels were measured every 1 h.Results MAP,CI,and SMBFI significandy decreased and P(g-a) CO2 increased after lipopolysaccharides infusion in three groups.After 2-hour treatment,MAP in norepinephrine group[(70 +3) mm Hg]was higher than that of dopamine group[(66±4) mm Hg]and dobutamine group[(65±4) mm Hg](P <0.05).SMBFI in norepinephrine group [(18.7±2.9) ml/(kg·min)]was higher than that of dopamine group[(16.2±1.6) ml/(kg·min)]and dobutamine group[(15.8±1.9) ml/(kg·min)](P<0.05).P(g-a) CO2 in norepinephrine group [(30±6) mm Hg]was lower than that of dobutamine group[(23±5)mm Hg](P<0.05).Condnsion As an adjuvant therapy of volume resuscitation,norepinephrine is more effective than low dose dopamine and dobutamine in improving splanchnic perfusion. 相似文献
47.
目的研究脊髓损伤后热休克蛋白27(HSP27)、表皮脂肪酸结合蛋白(FABPs)和金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)的基因表达及甲基强的松龙(MP)对其表达的影响.方法SD大鼠30只.随机分为假手术组、单纯脊髓损伤组(损伤组)及脊髓损伤+大剂量MP治疗组(MP组),每组10只.应用改良的Allen's打击法致T8脊髓损伤.MP组大鼠伤后即刻从尾静脉内注射大剂量MP(30mg/kg).损伤后24h切取损伤平面上下0.5cm的脊髓组织,进行RT-PCR反应,检测HSP27、FABPs和TIMP-1的基因表达.结果术后24h假手术组HSP27、FABPs和TIMP-1的基因表达相对丰度分别为0.0643±0.0152、0.6413±0.1005和0.7091±0.0577;损伤组上述三个因子的表达升高,分别为1.0013±0.3861、1.2187±0.2851和0.8971±0.1092,与假手术组比较差异有显著性(P<0.01、P<0.05、P<0.05);MP组上述三个因子的表达继续升高,分别为1.2858±0.1384、1.7122±0.1766和1.2081±0.1093,与损伤组比较差异有显著性(P<0.05、P<0.01和P<0.01).结论脊髓损伤后,邻近损伤处的脊髓组织中HSP27、FABPs及TIMP-1的基因表达显著增高,大剂量MP能进一步促进三个因子表达,发挥组织保护作用. 相似文献
48.
非控制性出血休克大鼠早期低压液体复苏的理想复苏压力研究 总被引:4,自引:1,他引:3
目的利用大鼠非控制性出血休克模型,探讨早期低压复苏的理想复苏压力。方法W istar大鼠64只,基础平均动脉血压(MAP)为(129.9±14.3)mmHg,断脾法复制非控制性出血休克模型,将血压(MAP)降至40或50mmHg,分为3个处理时段,第1时段模拟院前救治时段,用2∶1乳酸林格氏液和6%的右旋糖酐输注分别将MAP维持在40、50、60、70、80、100mmHg,维持1小时;第2时段模拟医院确定性处理情况,结扎脾动脉止血,输血输液将MAP恢复至100mmHg,维持2小时;第3时段,观察第1时段不同压力复苏对大鼠休克复苏效果的影响。观察指标包括动物存活情况、血压、液体输注量、血细胞比容及动脉血气等。结果院前急救采用高压复苏(80、100mmHg),动物存活时间短,在第1时段末就有50%的动物死亡,需要的液体输注量大,血液稀释严重,代谢性酸中毒明显,血气指标差;而以<70mmHg(50、60、70mmHg)的血压复苏,动物存活时间延长,液体输注量小,血液稀释轻,血气指标正常或接近正常;以50、60mmHg血压输注效果最好,但太低的输注压力(40mmHg)也不利于休克复苏,在第三时段末动物死亡率为75%。结论对非控制性出血休克及活动性出血,止血前采用高压复苏会增加血液丢失及血液稀释,明显影响休克复苏效果,适当低压复苏有利于动物的后期恢复,输注压力以50、60mmHg最好,但太低的输注压力(40mmHg)也不利于休克复苏。 相似文献
49.
以小麦(Triticum aestivum L.)品种石4185为材料,研究了45 ℃处理0~120 min对小麦未成熟籽粒谷甘胱肽转移酶(GST)、谷胱甘肽还原酶(GR)、过氧化氢酶(CAT)和过氧化物酶(POD)活性, 超微弱发光,种子萌发和愈伤组织诱导的影响.结果表明,热休克处理使未成熟籽粒萌发率、愈伤组织诱导率和GST活性明显增加,且其作用随处理时间的延长而增大;在处理过程中, CAT活性先减少后增加,热休克对GR活性无明显影响.GST的活性与蛋白质质量分数呈显著正相关. 相似文献
50.
热休克蛋白(heatshockproteins,HSPs)为一组高度保守的蛋白质,因其独特的生物学特性及功能,在生物体内广泛参与了多种复杂的功能活动,人们将其生物活性比喻为“瑞士军刀”[1]。已有研究证明HSPs对感染性休克动物具有保护作用,但是诱导热休克蛋白产生的因素多数对机体有害,体内外实验研究发现Gln能诱导动物的热休克反应,特异性增强起主要保护作用的HSP72和HSP27的表达,从而改善感染性休克动物的生存率。本文对应用Gln诱导体内HSPs表达,从而提高机体对感染性休克的防御作用及可能机制作一综述。1谷氨酰胺对热休克蛋白表达的影响Gln是… 相似文献